凯氏定氮法的操作方法

凯氏定氮法是测定化合物或混合物中总氮量的种方法。即在有催化剂的条件下，用浓硫酸消化样品将有机氮都转变成无机铵盐，然后在碱性条件下将铵盐转化为氨，随水蒸气蒸馏出来并为过量的硼酸液吸收，再以标准盐酸滴定，就可计算出样品中的氮量。由于蛋白质含氮量恒定，可由其氮量计算蛋白质含量，故此法是经典的蛋白质定量方法。

操作方法

1、样品处理：称取0.2-2.0g固体样品或2-5g半固体样品或吸取10-20ml液体样品（约相当氮30-40mg），移入干燥的100ml或500ml定氮瓶中，加入0.2g硫酸铜，6g硫酸钾及20毫升硫酸，稍摇匀后于瓶口放小漏斗，将瓶以45度角斜支于有小孔的石棉网上，小火加热，待内容物炭化，泡沫停止后，加强火力，并保持瓶内液体微沸，至液体呈蓝绿色澄清透明后，再继续加热0.5小时。取下放冷，小心加20ml水，放冷后，移入100ml容量瓶中，并用少量水洗定氮瓶，洗液并入容量瓶中，再加水至刻度，混匀备用。取与处理样品相同量的硫酸铜、硫酸钾、浓硫酸同方法做试剂试验。但是此法危险，不易在实验室演示，现在大多数实验室有消煮仪次可以行多个（次可以消煮16个样品）样品处理，并有通风橱行通风，温度可以自己设定，更加安和可操作性，因此逐步成为主要的凯氏定氮法的处理方法。

般消解温度都设在240度及240度以上，如果想快速消解可以适当提温度甚至可以用zui大温度行消解。

2、按图装好定氮装置，于水蒸气发生器内装水约2/3处加甲基红示剂数滴及数毫升硫酸，以保持水呈酸性，加入数粒玻璃珠以防暴沸，用调压器控制，加热煮沸水蒸气发生瓶内的水。

3、向接收瓶内加入10ml 2%硼酸溶液及混合示剂1滴，并使冷凝管的下端插入液面下，吸取10.0ml样品消化液由小玻璃杯入反应室，并以10ml水洗涤小烧杯使入反应室内，塞紧小玻璃杯的棒状玻璃塞。将10ml 40%氢氧化钠溶液倒入小玻璃杯，提起玻璃塞使其缓慢入反应室，不能立即将玻璃盖塞紧，这样易使玻璃塞粘在样口，应用蒸馏水冲洗然后再盖，并加水于小玻璃杯以防漏气。夹紧螺旋夹，开始蒸馏，蒸气通入反应室使氨通过冷凝管而入接收瓶内，蒸馏5min。移动接收瓶，使冷凝管下端离开液皿，再蒸馏1min，然后用少量水冲洗冷凝管下端外。取下接收瓶，以0.05N硫酸或0.05N盐酸标准溶液定至灰色或蓝紫色为终点。

同时吸取10.0ml试剂消化液按3操作。